طراحی و توسعه تکنیک nasba-elisa برای تشخیص عفونت ویروس نقص ایمنی انسان در خون

چکیده طی دو دهه اخیر روشهای تشخیص hiv نقش مهمی را در حفظ سلامت در جهان ایفا کرده اند. روشهای مولکولی با حساسیت بالا نیز که اخیرا توسعه یافته اند قادرند عفونت را در مراحل بسیار ابتدایی نیز تشخیص دهند ؛ اما بسیاری از این تکنولوژی ها در کشور های در حال توسعه به دلایل اقتصادی قابل اجرا نیستند ؛ ولی چنانچه از هزینه های مربوط به این روشها کاسته شود استفاده از انها میسر می شود . با شروع عفونت hiv-1 اولین مارکر خونی که نشانه ای ازوجود عفونت است rna ویروسی می باشد. از میان روشهای موجود که شناسایی rna را هدف قرار می دهند متداول ترین تکنیک ها nasba و rt-pcr می باشند . nasba یک روش تکثیر هموژن و تکدماست که از عملکرد هم زمان سه انزیم و دو پرایمر برای تکثیر توالی هدف استفاده می کند. nasba مزیتهای متعددی نسبت به rt-pcr ارائه می کند. nasba یک روش تکدما است که نیاز به استفاده از انزیم های مقاوم حساس به حرارت و دستگاه ترمال سایکلر را برطرف می سازد. بنابراین سنجشی مبتنی بر nasba برای تشخیص hiv-1 rna بنا نهاده شد و روش اشکارسازی محصولات نیز elisa قرار داده شد . با وارد کردن نوکلئوتید 11-dig-utp در مخلوط واکنش rna های تولیدی نشاندار شد. محصولات nasba وارد فرایند elisa شد که در ان یک کاوشگر متصل به بیوتین به محصولات در فاز مایع متصل می شود . هیبرید ها rna-dna به یک پلیت میکروتیتر پوشانده شده با اویدین منتقل شدند و اشکارسازی نهایی به روش رنگ سنجی با اضافه کردن کونژوگه انتی دیگوکسی ژنین- پراکسیداز و سوبسترای 2و2 ازینو دی 3 اتیل بنز تیازولین سولفونات صورت گرفت . روشی که تشریح شد قابل انطباق بر ازمایشگاههای تشخیصی می باشد .